如何进行室内浮游菌和沉降菌的检测?
微生物检测方法有空气悬浮微生物法和沉降微生物法两种,采样后的基片(或平皿)经过恒温箱内37℃、48h的培养生成菌落后进行计数。使用的采样器皿和培养液必须进行消毒灭菌处理。采样点可均匀布置或取代表性地域布置。
悬浮微生物发采用离心式、狭缝式和针孔式等碰击式采样器,采样时间应根据空气中微生物浓度来决定,采样点数可与测定空气洁净度测点数相同。各种采样器应该按仪器说明书规定的方法使用。
沉降微生物法,应采用直径为90mm培养皿,在采样点上沉降30min后进行采样,培养皿最少采样数应符合下表的规定。制药厂洁净室(包括生物洁净室)室内浮游菌和沉降菌测试,也可采用按协议确定的采样方案。
空气洁净度级别 | 培养皿数 |
<J5 | 44 |
J5 | 14 |
J6 | 5 |
≥J7 | 2 |
用培养皿测定沉降菌,用碰撞式采样器或过滤采样器测定浮游菌,还应遵守以下规定:
1. 采样装置采样前的准备及采样后的处理,均应在设有高效空气过滤器排风的负压实验室进行操作,该实验室的温度应为22 ±2 ℃;相对湿度应为50% ±10%;
2. 采样仪器应消毒灭菌;
3. 采样器选择应审核其精度和效率,并有合格证书;
4. 采样装置的排气不应污染洁净室;
5. 沉降皿个数及采样点、培养基及培养温度、培养时间应按有关规范的规定执行;
6. 浮游菌采样器的采样率宜大于100L/min;
7. 碰撞培养基的空气速度应小于20m/s。
浮游菌采样器采样步骤
1、在有平台的洁净室内编制培养皿 (XX 洁净室, XX 测点), 操作前应用浸湿 75%乙醇的医用脱脂棉花擦拭平台。测试人员双手用同样方法严格消毒。在编制过程中再次仔细检查培养基平皿的质量, 有变质、破损或污染不能使用。
2、用浸湿 75%乙醇的医用脱脂棉花擦拭采样器的采样口, 采样管、采样器的项盖, 转盘及罩子内外表面。
3、采样器经消毒后不放入培养皿, 启动仪器空转运行不少于5 min, 使仪器中的残余消毒剂蒸发。
4、根据手术室的洁净度级别设定采样量,采样器的流量(L/min)X 采样时间(min)=采样量(L)。
5、放入培养皿,盖上盖子后调节采样器缝隙高度。采样操作时, 培养皿应轻拿轻放, 用“五指抓拿”培养皿外径, 尽量避免人为对样本造成污染。
6、进行采样点的布置及采样点数量。
沉降菌采样器采样步骤
洁净区沉降菌采样依据:GB/T 16294-2010 《医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法》
1.无菌培养基、操作SOP准备
选择Φ90mm×15mm规格的培养皿,培养皿盖和底盘均较平整,无损坏。准备培养皿数量根据采样区域进行计算
2.按区域(设备)代码标记培养皿
3.按照从A级→B级→C级的顺序和采样布局铺放培养皿。培养皿铺设时按照从洁净度级别较高的区域向洁净度级别较低的区域依次铺设;按照设备从前向后顺序或者操作人员面向区从前向后的顺序铺设
4.采样计时
每铺设一个区域(设备)培养皿后进行计时,静态采样为0.5小时,动态采样为4小时。
5.培养皿收集
收集已经采集的培养皿时,按照铺设培养皿相反的顺序依次收集,收集的第一个培养皿为铺设的最后一个;每收集一个培养皿后将培养皿倒置(盖朝下、底朝上),收集完一个区域后将所有培养皿放置在洁净袋中;将收集的所有培养皿经专人复核后交于检验人员(QC)。
森馥科技空气质量事业部
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